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將含有礦物奈米纖維的膠體溶液與大腸桿菌和質粒DNA混合

在過去的10年中,宮崎縣的Yoshida 研究組已經發表了一系列論文,確認和擴充套件了Appel等(1988)的觀察,即可以透過使用礦物奈米纖維將質粒轉化大腸桿菌(Yoshidaetal 2001,2002, 2007; Yoshida and Sato 2009)。

將含有礦物奈米纖維的膠體溶液與大腸桿菌和質粒DNA混合,並立即鋪到適當的選擇性平板上。用聚苯乙烯棒(德國Sarstedt公司)在瓊脂平板表面塗布時產生的滑動摩擦力,可以使附著DNA的礦物纖維穿透進細菌。

將含有礦物奈米纖維的膠體溶液與大腸桿菌和質粒DNA混合

轉化體的數量在暴露於礦物纖維:DNA複合物中最初的60s期間是增加的,然後會到達一個1X 106~2X 10°轉化體/μg° DNA的平臺。雖然不很高效,但是該方法非常簡單。直到最近,阻礙其更廣泛應用的原因是其作為轉染試劑的礦物纖維的性質: Appel 等和Yoshida研究組都使用溫石棉(chrysotile) 一石棉的一種。

然而,最近,Yoshida的發現已得到證實(Wilharm et al。 2010),可以使用非致癌纖維(西班牙海泡石)的懸浮液替代Yoshida和他的同事使用的有潛在危險的溫石棉晶須。對使用此方法感興趣的人應該從由Wilharm 等(2010) 概述的基本方案開始,現轉載如下。

將含有礦物奈米纖維的膠體溶液與大腸桿菌和質粒DNA混合

1。將10mL指數期早期大腸桿菌培養物在4“C離心10min。

2。將細菌沉澱重懸於1mL冰冷的TSS溶液。

3。將0。1mL細菌懸浮液轉移到- -個置於冰上的預冷聚丙烯管。

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