AbMole精研抑制劑十年，最新的科研動態不斷與您分享。本期與您分享的是：MicroRNA-325-3p透過抑制小鼠的RIPK3和程式性壞死來保護心肌梗塞後的心臟。

受體相互作用的絲氨酸-蘇氨酸激酶 3 （RIPK3） 介導的壞死性凋亡與心肌梗死 （MI） 的進展有關，但其潛在機制，特別是是否涉及 microRNA （miR-NAs），在很大程度上仍然未知。本研究中採用微陣列分析篩選MI小鼠心肌組織miR-325-3p的表達，並透過qRT-PCR證實該表達。使用商業試劑盒測量心肌酶的水平，並利用超聲心動圖系統檢測心臟功能引數。使用 H&E、TCC 和 Masson 三色染色檢查心臟組織的病理特徵和梗死麵積，並使用原位 TUNEL 測定確定細胞凋亡的數量。分離心肌細胞，然後進行體外缺氧誘導。使用蛋白質印跡測量 RIPK1、RIPK3 和磷酸化 MLKL （p-MLKL） 蛋白的表達。透過 MTT 測定分析小鼠心肌細胞活力。使用 TargetScan v7。2 預測 miR-325-3p 的 mRNA 靶標，然後使用雙熒光素酶報告基因檢測進行驗證。 miR-325-3p的過表達明顯降低乳酸脫氫酶（LDH）、磷酸肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的表達水平，抑制左心室舒張末期直徑（LVEDD）和左心室收縮末期直徑 （LVESD），並促進左心室射血分數 （LVEF） 和左心室縮短分數 （LVES）。此外，miR-325-3p 的過表達減弱了心臟組織的損傷程度，減少了梗死麵積並下調了壞死相關蛋白 RIPK1、RIPK3 和 p-MLKL 的表達。結果表明，在 MI 期間發生的 RIPK1/RIPK3/p-MLKL 軸誘導的壞死性凋亡是由 miRNA 模組 miR-325-3p 介導的，該模組可以透過抑制 RIPK3 的表達來有效改善 MI 的症狀。

Protease inhibitor cocktail （Abmole， M5293 ） 由6種蛋白酶抑制劑最佳化配比配置而成，能夠保留蛋白質的完整性，產出率較高。在本研究中用於Western blot實驗中保護蛋白質。

Fig。 5 Infuences of miR-325-3p dysregulation on the apoptosis of cardiomyocytes in MI mice。

如圖 5c  Western blot實驗結果所示，與健康小鼠的水平相比，它們在 MI 小鼠中均明顯上調（P < 0。01），並且它們在 antagomiR-325-3p 處理的 MI 小鼠中達到最高表達水平。 然而，agomiR-325-3p的給藥大大減弱了它們在MI小鼠心臟組織中的表達水平

Fig。 6 Infuences of miR-325-3p dysregulation on the viability of cardiomyocytes in vitro。

Western blot結果表明，缺氧誘導的心肌細胞中RIPK1、RIPK3和p-MLKL的表達水平顯著上調（P < 0。01），並在antago miR-325-3p處理時達到最高水平

鳴謝：Dong-Ying Zhang， et al。 BMC Mol Biol。 2019 Jun 27；20（1）：17。