1953年，奧黛麗·赫本主演《羅馬假日》，故事講述了一位歐洲某公國的公主與一個美國記者之間在義大利羅馬一天之內發生的浪漫故事。影片上映後，赫本飾演的皇室公主曾一度掀起“赫本頭”浪潮。該片是奧黛麗·赫本擔綱女主角的第一部電影，她也因此片獲得奧斯卡金像獎最佳女主角獎，金球獎最佳女主角獎。

比利·懷德導演曾說：“上帝親吻了一個小女孩兒的臉頰，於是赫本誕生了。”1954年，二人合作影片《龍鳳配》，影片的主演還包括亨弗萊·鮑嘉和威廉·霍爾登，前者曾極力反對赫本出演女主角莎賓娜一角，鮑嘉曾抱怨赫本總要不斷校對臺詞。本片拍攝之後，赫本的髮型再一次成為“時尚”的代名詞，成為眾多女性們競相模仿的典範。片中赫本的絕大部分服飾都出自她的“私人設計師”于貝爾·德·紀梵希（Hubert de Given。。。

1956年，赫本與亨利·方達、梅爾·費勒合作影片《戰爭與和平》，這是托爾斯泰的同名文學著作的首部翻拍電影，赫本演繹了女主角娜塔莎從情竇初開的少女到成為頓悟人生的成熟女性的過程，導演金·維多憑此片獲得了第29屆奧斯卡金像獎的最佳影片提名。

1959年，赫本主演影片《修女傳》，影片講述了赫本所飾演的璐克修女從進入修道院，適應教會緘默、謙卑及自治等首要的處世之道，到最後離開修道院及心理過程。拍攝本片對赫本的人生觀造成了很大的影響，隨著拍攝過程造訪精神病院、麻瘋病人的看護所，赫本與志願工作者談過話，並實地觀察過醫院的手術過程後，她第一次感覺到精神如此充實飽滿，她說：“我的內在擁有了一種全新的安祥與平靜，一些對我來說曾經似乎很重要的東西，如。。。

1961年，赫本與雪梨·麥克萊恩、詹姆斯·加納合作影片《雙姝怨》，這是導演威廉·惠勒和赫本繼《羅馬假日》後的第二次合作，赫本和雪梨在片中共同管理著一間私立學校，前者沉靜壓抑，後者掙扎矛盾，影片對同性關係的刻畫也十分具有先鋒意識。

1961年，赫本主演《蒂凡尼的早餐》，飾演崇拜金錢和物質，同時卻不失天真善良的霍莉，片中她身著連身黑長裙、手持煙桿的打扮，是其個人極有象徵性的劇照畫面之一。赫本也憑這一角色獲得了第34屆奧斯卡金像獎最佳女主角提名。

1964年，喬治·庫克執導，赫本主演的影片《窈窕淑女》上映，片中赫本飾演的賣花女伊莉莎家境貧寒，但眉清目秀，聰明乖巧，經過語言學家希金斯的訓練，她成功成為了一名氣質高雅、儀態萬千的窈窕淑女。影片獲得了第37屆奧斯卡最佳影片、最佳導演等大獎。

1966年，赫本再次與威廉·惠勒合作帶有浪漫色彩的犯罪影片《偷龍轉鳳》，片中赫本既有少女的天真可愛，又有成熟女性的時尚嫵媚。

1967年，赫本主演影片《盲女驚魂記》，飾演一個盲女。拍攝本片時，38歲的赫本眼角眉梢已有皺紋，但優雅的氣質和更為精進的演技卻讓她綻放了另一種光芒。

1967年，赫本與阿爾伯特·芬尼合作《麗人行》，二人在片中為了挽救他們之間瀕臨破裂的夫妻關係以及名存實亡的愛情，開始了環遊法國的尋愛之旅。 在現實生活中剛剛經歷過離婚風波的赫本在片中的表現也十分真實自然。在此片之後，赫本就逐漸淡出電影銀幕，將更多精力投入到家庭與慈善事業中。