相信大家也跟小編有過類似經歷：實驗室看師兄做的 qPCR ，qPCR 曲線標準，結果穩定。再看看自己，往往則是要麼不起峰，要麼亂起峰，曲線也奇奇怪怪的。。。各種問題層出不窮。

為了幫助大家合理避坑，我們整理了部分常見的問題和分析答疑，希望能幫助大家拿到更好的結果。

（文末還準備了雙十一福利哦~）

問題一：qPCR 擴增效率低

出現原因：

試劑和體系問題：反應體系中有試劑被降解；反應體系加液量不足；

設計問題：

引物和探針設計有問題、產物長度過長；反應條件不夠最佳化。

解決對策：

•

確保實驗所用的試劑都沒問題，按照反應體系進行加樣操作；

•

參考文獻和軟體，設計更優的引物或探針，產物控制在 80~150 bp 的長度。

問題二：結果出現假陽性功能

出現原因：

試劑和體系問題：使用試劑、模板被汙染；體系中鎂離子濃度過高；引物濃度過高；

設計問題：

引物設計有問題，產生二聚體和髮夾結構。

解決對策：

• 操作要做規範，避免誤操作引起的試劑、模板的汙染；

•

有汙染髮生及時確定汙染源，該丟的趕緊丟掉；

•

引物設計好後，要用軟體做驗證，避免二聚體和髮卡結構的產生。

除了以上問題，大家在 qPCR 實驗中，是否會經常遇到很多困擾已久問題：如何設計一個成功的檢測？如何最佳化多重反應？如何區分真正的 Ct 值和背景值？如何提高 qPCR 的檢測靈敏度……

授人以魚不如授人以漁，想要一勞永逸解決實驗困擾，不如來聽聽師姐推薦的寶藏課程。

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