編者按
：肺癌是當今世界嚴重危害人類健康的惡性腫瘤，分子生物學進展大大改變了晚期NSCLC的治療格局。肺癌的靶向治療離不開肺癌的分子檢測，分子檢測涉及到各個方面，任何一個因素都可能影響分子檢測結果準確性。為了規範肺癌的分子檢測，AZ聯合國內相關專家對肺癌分子檢測的樣本要求、檢測平臺、檢測治療與規範和檢測觀念進行全面闡述。本期91360智慧病理網邀請南京鼓樓醫院病理科樊祥山主任就肺癌分子病理檢測後的資料處理以及剩餘標本的處理規範進行介紹，以提高病理醫生對分子病理檢測後的資料及標本處理重要性的認識。
樊祥山 主任
南京大學醫學院附屬鼓樓醫院主任醫師，醫學博士
江蘇省病理質控中心主任，南京市病理質控中心主任
中華醫學會病理學分會青年委員會副主任委員
中國抗癌協會腫瘤病理專委會常務委員、食管癌學組副組長及中國腫瘤結構化病理報告規範專案執行秘書長
中國抗癌協會淋巴瘤專委會委員
中國醫師協會病理科醫師分會委員
江蘇省醫學會病理學分會副主任委員，消化疾病學組組長
中國合格評定國家認可委員會（CNAS）ISO15189醫學實驗室技術評審員，教育部學位中心評審專家
2017年獲“第三屆中國傑出青年病理醫師”稱號
美國MD Anderson癌症中心血液病理科訪問學者
《中華病理學雜誌》和《中華消化內鏡雜誌》等雜誌編委
主持國家、省市級課題9項；以第一或通訊作者發表論文90餘篇，主（參）編、譯著12部。
研究方向為消化病理、淋巴瘤，胸肺縱隔和泌尿系統腫瘤和數字病理等。
分子病理檢測的資料及標本處理規範
近年來，由於人口老齡化、全球工業化、環境汙染等因素，全球範圍內癌症發病率死亡率都不斷增加。世衛組織最新癌症資料顯示：2020年全球新發癌症病例1929萬例，其中中國新發癌症457萬人，佔全球23。7%；死亡病例996萬例，其中中國癌症死亡人數300萬，佔癌症死亡總人數30%［1］。我國癌症新發患者數與死亡人數均為全球第一，因此，癌症預防與診療手段的不斷更新對改善癌症患者預後，減少經濟負擔具有重要意義。隨著分子病理診斷技術及靶向藥物研發不斷進步，多種惡性腫瘤個體化靶向治療也獲得了長足發展，顯著提高了患者術後無進展生存時間，生活質量也穩步提高。因此，傳統的以形態學為基礎的組織學觀察等技術已無法滿足精準醫療的需要，選擇準確、快速、價格具有優勢的基因檢測方法，開展精準分子病理診斷對臨床醫師選擇合適靶向治療方案具有重要意義。
1 規範分子病理檢測的資料儲存及檢測後標本處理的重要性
包括熒光原位雜交（FISH）、PCR、數字PCR、二代測序（NGS）等分子病理檢測技術在內，其在臨床惡性腫瘤診療中的應用越來越廣，檢測技術與檢測平臺越來越先進。各大醫院病理科幾乎均已開展分子病理檢查檢測，也為腫瘤患者的靶向治療提供了更多治療依據。但僅僅做到引入先進裝置及分子病理檢測方法來開展相關檢測是遠遠不夠的。
報告完成後，資料仍應按照相應指南要求儲存。以NGS為例，資料下機後，實驗室需要在生物資訊分析過程中對原始資料及最後的結果資料進行標準化儲存，並要儲存相應的年限以備查。如以實驗室認證週期作為參考，資料應儲存3年以上，並能夠在系統中進行歷史資料跟蹤追溯查詢，不限於雲伺服器或者物理硬碟形式。此外，每份報告生信分析涉及軟體、演算法、引數與資料庫版本等必須詳實記錄，以便回顧。除按照國際標準格式規範，編號儲存管理上述原始資料外，偏離樣本也應單獨記錄在本地變異資料庫中，以便後期驗證變異真實性。相應資料儲存及共享應遵循實驗室制定的資料安全性與保密性原則。
其他的分子檢測方法的資料處理總體上與NGS基本相同，只是不同檢測方法資料呈現的形式不同。對這些資料的解讀需要專門人員，根據相關共識或指南進行。資料儲存的方式目前國內外尚未有共識，儲存是為了以後更好的進行資料溯源和質量控制。儲存的形式不同單位方式可能不同，但原則上應利於查詢、資料溯源和安全性高等。
2 分子病理檢測報告解讀
腫瘤分子病理檢查檢測結果報告解讀遵循內容簡明、結果明確、解釋清楚、資訊充分的原則，便於臨床理解和制定治療方案。由於NSCLC有多種針對不同驅動基因的靶向藥物應用於臨床，而臨床上送檢樣本大多為穿刺活檢樣本，為了有效利用檢測樣本，臨床上推薦採用NGS技術進行NSCLC的基因檢測。對於NSCLC NGS技術的檢測報告，《二代測序技術在NSCLC中的臨床應用專家共識（2020版）》指出NGS檢測報告的解讀應由腫瘤科醫師、病理科醫師、分子生物學專家、生物資訊學專家等多個專業領域組成的肺癌分子腫瘤專家委員會（MTB）討論，針對檢測報告中的基因變異資訊，基於循證醫學證據來確定臨床治療方案［3］。《二代測序臨床報告解讀指引》中NGS檢測報告主要有：1）全陰報告：當醫生面對一份體細胞變異的“全陰報告”時，應首先考慮送檢樣本是腫瘤組織、外周血cfDNA或其它樣本；或者選擇的NGS panel是否與患者的腫瘤型別相匹配，這樣可以幫助我們判斷該陰性結果是真的陰性還是基因狀態未知。2）突變丰度及複製數：根據基因突變的型別和已有的報道及指南，基因變異采用A-D 4級分級。3）多基因變異：對於多種潛在驅動基因變異共存的情況，要結合腫瘤型別、既往治療史、相對突變丰度、既往分子檢測結果等資訊綜合判斷。4）胚系突變：胚系變異的致病性分為5級，4/5級胚系變異具有相應的臨床指導價值。有些NGS檢測報告還含有腫瘤突變負荷、微衛星不穩定性等內容［4，5］。臨床醫生根據檢測結果，參照相關指南以及檢測報告上推薦的藥物，根據患者和醫院的實際情況選擇藥物進行治療。
腫瘤的分子病理檢測結果應結合檢測方法、樣本型別、患者情況等相關資訊進行報告解讀。《中國非小細胞肺癌患者EGFR T790M基因突變檢查專家共識》要求EGFR T790M基因突變檢測報告中應包括樣本編號、接受日期、患者資訊、樣本具體資訊如臨床診斷、疾病是初治還是復發、標本來源與型別、標本質量、病理型別以及質控相關的資訊［3］。另外還有檢測專案與位點、檢測技術、使用儀器及試劑、檢測的敏感度和侷限性等內容；臨床醫生透過這些資訊可以獲知本次檢測樣本的治療，以便對檢測結果可靠性有個較為準確的評估。另外，對於檢測結果應給予陽性、陰性或者需要複檢等，臨床醫生根據陽性結果可以CSCO/NCCN指南中推薦使用奧希替尼藥物進行治療。而對於檢測結果陰性時，需要排除由於DNA樣本質量問題和其他實驗操作問題導致的假陰性，尤其當血液樣本檢測陰性時，應建議進行復測。
目前分子檢測方法比較多，不同檢測方法具有不同的靈敏度，而且不同樣本對檢測的要求也不同，這就需要分子病理診斷醫生根據樣本選用合適的分子檢測方法。當出現結果可疑時，應採用其它分子檢測方法進行補充和驗證。
3 分子病理檢測後標本的處理
除此以外，分子病理檢測結束後，除按照《醫療機構臨床基因擴增檢驗實驗室管理辦法》、《臨床試驗生物樣本的處理與儲存規範》等指南要求的實驗前生物樣本儲存方法外，還應及時將檢測後標本，包括核酸文庫（DNA/RNA）、生物樣本、備份樣本等分類儲存。其中，含特殊病原體的樣本應按照《醫療廢物管理條例》及相關規定專類管理，其他一般樣本具體簡述如下：
3.1 組織學標本
目前臨床中的分子病理組織學樣本獲取大部分仍然來自於石蠟包埋切片（FFPE）樣本，該部分樣本應參照病理科蠟塊樣本管理規定儲存，以便複核。少數新鮮樣本則應分裝、儲存在規定的-80℃冰箱等相應裝置中，儲存、運輸均應符合《臨床試驗生物樣本的處理與儲存規範》等指南要求。
3.2 細胞學標本
細胞樣本應用於檢測時，如已製備為蠟塊及FFPE切片用於檢測，則後期儲存條件與組織學標本類似。部分新鮮樣本如積液細胞塊直接用於樣本處理檢測，則應在離心、固定後凝固硬化，保存於-80℃冰箱等低溫裝置中以便後期處理。
3.3 液體標本
其他液體標本如血液樣本用於分子病理檢測後，儲存條件已較為成熟。剩餘樣本應儘快轉移至專用-80℃冰箱長期儲存，以便後期複核處理。
3.4 核酸樣本
分子檢測後剩餘的核酸樣本，不能隨意丟棄，需要分別按照要求進行標記和儲存，以備將來複查或研究等。核酸樣本需要使用專門的保護劑防止核酸降解，並放入-80℃冰箱儲存，目前也有常溫儲存核酸方法亦可採用。
4 小結
綜上所述，分子病理檢測在我國大部分三甲醫院病理科已經廣泛開展，但除流程質量控制外，檢測後的資料及標本處理規範同樣非常重要，應引起從業病理醫師及相關管理人員重視。
參考文獻
1，世界衛生組織國際癌症研究機構官網。 https：//www。iarc。fr/faq/latest-global-cancer-data-2020-qa/。
2，中國臨床腫瘤學會腫瘤生物標誌物專家委員會 《中國非小細胞肺癌患者EGFR T790M基因突變檢測專家共識》制定專家組 中國非小細胞肺癌患者EGFR T790M基因突變檢測專家共識。中華醫學雜誌，2018，98（32）：2544-2551。
3， 中國臨床腫瘤學會非小細胞肺癌專家委員會。 二代測序技術在NSCLC中的臨床應用中國專家共識（2020版）。中國肺癌雜誌，2020，23（9）：741-761。
4，二代測序臨床報告解讀專家組。 二代測序臨床報告解讀指引［J］。 循證醫學， 2020， 20（4）： 193-202。
5，《臨床分子病理實驗室二代基因測序檢測專家共識》編寫組。臨床分子病理實驗室二代基因測序檢測專家共識。中華病理學雜誌，2017， 46（3）： 145-148。
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本文的採訪/撰稿/釋出由阿斯利康提供支援。
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